Método colorimétrico: un análisis basado en una comparación de la saturación de color de las sustancias investigadas y conocidas. Los resultados de las pruebas físicas y químicas son de gran valor para muchas ramas de la ciencia, pero la mayoría de las investigaciones se utilizan en medicina.
La esencia del método colorimétrico
Hay muchos tipos de pruebas que determinan la composición química de las sustancias. Algunos de ellos son universales y se utilizan ampliamente en varios campos, otros son específicos, con mayor precisión. El método colorimétrico es universal.
La esencia del análisis radica en el hecho de que la saturación de color de una solución con una concentración desconocida se compara con el color de una solución estándar. Durante el análisis, como resultado de la interacción del componente investigado con un determinado reactivo, se forma un compuesto coloreado. Una vez completada la reacción, el tono resultante se compara con el color de las soluciones, cuya concentración ya se conoce.
Se cree que el fundador de la colorimetría es Robert Boyle. Él usó apretartaninos para distinguir el hierro del cobre en solución. Fue Boyle quien notó que cuanto mayor es la concentración de hierro en la solución, más rico es el tono de esta última.
Colorimetría
La colorimetría es un método para determinar la cantidad de una sustancia en soluciones. El análisis se basa en la ley de Bouguer-Lambert-Beer: cuando un haz de luz incide en una capa absorbente densa de una sustancia, su intensidad se debilita.
El método colorimétrico para determinar la concentración de una sustancia puede usar una comparación visual o una comparación usando instrumentos especiales para medir la intensidad del color. La comparación se realiza de forma directa y compensatoria.
- Directo. El método consiste en comparar el nivel de color de la solución de prueba a una determinada densidad y temperatura del líquido con una solución de referencia. Cuando se utilizan fotocolorímetros y espectrofotómetros, se utiliza agua destilada como solución de referencia. Los dispositivos miden la intensidad de la corriente, que depende de la intensidad de la luz.
- Compensatorio. El método se basa en acercar el color de la muestra estudiada a la de referencia. El resultado se consigue añadiendo un disolvente o aumentando la altura de la capa del medio teñido.
El uso de un espectrofotómetro, un monocromador y otros instrumentos de precisión simplifica aún más el ya simple método de investigación y le permite aumentar la precisión de los resultados. Estos dispositivos pueden medir la cantidad de transmisión de luz y determinar la longitud de onda.
Dónde se aplica el análisis
El método de análisis colorimétrico se usa cuando se conoce la composición química exacta, hay una muestra de referencia para comparar y la temperatura de la muestra de prueba y de referencia es la misma. Si necesita determinar rápidamente la cantidad de una sustancia coloreada, pero es tan pequeña que es imposible aplicar el método analítico.
La colorimetría se usa ampliamente en medicina para la investigación bioquímica clínica y otras áreas:
- industria farmacéutica;
- industria de alimentos y bebidas alcohólicas;
- agronomía (determinación de la calidad del suelo).
Pros y contras
El método colorimétrico, como cualquier otro, tiene pros y contras.
Las ventajas incluyen lo siguiente:
- facilidad de análisis, procedimientos preparatorios mínimos;
- posibilidad de probar incluso con una pequeña cantidad de material de prueba;
- no hay necesidad de equipos costosos, aunque últimamente se utilizan cada vez más dispositivos modernos que no son baratos. Pero proporcionan el resultado más preciso.
Desventajas: baja precisión del análisis en comparación con los métodos analíticos.
Método de Biuret para la determinación de proteínas
La proteína en el suero sanguíneo es un indicador que refleja el estado de homeostasis. Un aumento en la concentración de un compuesto macromolecular en la sangre se llama hiperproteinemia, un bajo contenido se llama hipoproteinemia.
Proteínas enEl suero sanguíneo tiene una composición, estructura, propiedades diferentes, realiza diferentes funciones. Se dividen en enzimas, hormonas, inmunoglobulinas y otras. Todos los grupos de proteínas tienen una serie de características comunes, en base a las cuales se han desarrollado métodos para la determinación de compuestos orgánicos macromoleculares en fluidos biológicos.
De todos los métodos de la bioquímica clínica, los métodos colorimétricos para determinar la proteína son los más utilizados. Son relativamente baratos, lo cual es importante para las organizaciones presupuestarias. y son bastante simples. El más común es el método de biuret. La esencia del método: las proteínas en un ambiente alcalino reaccionan con el sulfato de cobre y forman compuestos de color púrpura. El contenido de proteínas en la sangre está determinado por la saturación de la tinción. El biomaterial para análisis se toma por la mañana con el estómago vacío.
El análisis es muy preciso, pero hay factores que afectan la concentración de proteína en la sangre:
- actividad física poco antes del muestreo de biomateriales;
- últimas semanas de embarazo y lactancia;
- el uso de los medicamentos Corticotropin, Miscleron, Clofibrate aumenta el contenido de proteínas en la sangre, y el uso de Pirazinamida y estrógeno - para reducir la concentración;
- posición incorrecta de la mano durante el muestreo de biomateriales.
Determinación del hierro
La cantidad de hierro en la sangre es uno de los principales indicadores en el diagnóstico de diversas enfermedades. La sustancia se concentra en la hemoglobina, que asegura el transporte de oxígeno a los tejidos. Paradeterminación de hierro por el método colorimétrico, con mayor frecuencia, se utiliza una solución de batofenantrolina (0,02%) como reactivo principal. Biomaterial - suero sin rastros de hemólisis.
La esencia del método: la interacción de los iones ferrosos y la batofenantrolina sulfatada forma un complejo coloreado, cuya saturación se determina fotométricamente. Para obtener una solución clara, es necesario seguir las reglas para muestrear el biomaterial, pero para determinar con precisión las densidades ópticas de los complejos hierro-ligando, el hierro se libera de la hemoglobina usando hidroxilamina y detergentes (dodecilsulfato de sodio). El resultado de la prueba determina la presencia y el grado de patología. La concentración normal de hierro debe ser:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (hombres);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (mujeres).
La deficiencia de hierro generalmente se asocia con pérdida de sangre, ingesta dietética inadecuada o mala absorción en el tracto gastrointestinal.
Prueba de colesterol
El colesterol es una sustancia orgánica que se encuentra en la pared celular de muchos organismos, incluidos los humanos. Es necesario para la producción de colecalciferol y hormonas esteroides. Un nivel de colesterol de 3,37-5,2 mmol/L se considera normal. El contenido elevado es una de las principales causas de la aterosclerosis.
Los métodos colorimétricos para determinar el colesterol le permiten reconocer las enfermedades vasculares en una etapa temprana. Según resultados anatomopatológicos en desenlace letal de isquemia, la concentración de alcohol lipofílico en pacientesfue 6.5-7.8 mmol/L.
El principio del método colorimétrico es que el colesterol es oxidado por la 3beta-hidroxi-esteroide oxidorreductasa, liberando peróxido de hidrógeno, que convierte la p-aminoatipirina en un compuesto coloreado. El contenido de colesterol está determinado por la saturación de su color.
Al realizar una prueba en un niño, se debe tener en cuenta que la concentración de colesterol en la infancia no debe superar los 4,1 mmol/l.
¿Qué es el método colorimétrico enzimático?
Las pruebas enzimáticas se basan en el uso de reacciones de enzimas con alta actividad. Se utilizan ampliamente en química analítica para determinar diversas sustancias, desde iones de nitrato hasta macromoléculas.
Los métodos enzimáticos (enzimáticos) son específicos, lo que permite el análisis de ciertas sustancias en presencia de otras sustancias de composición similar. Los métodos más comunes basados en el uso de la enzima - glucosa oxidasa. La prueba se utiliza para determinar la concentración de glucosa en la sangre. La precisión de la prueba permite que se use para ajustar la dosis de agentes hipoglucemiantes en pacientes con diabetes tipo 2.
El método del oxidante de glucosa se considera uno de los mejores métodos cuantitativos para determinar la glucosa. Tanto la sangre (capilar) como el suero se pueden usar como biomaterial, pero el plasma es más preferible porque tiene un contenido de hematocrito más bajo, lo que afecta negativamente la precisión del resultado.
Se utiliza principalmente el método cinético de la fotometría. Su esencia radica en el hecho de quela relación establecida de glucosa oxidasa y peroxidasa, durante un cierto período de tiempo después del comienzo de la reacción, la velocidad de formación de un compuesto coloreado será proporcional al nivel de glucosa en la muestra. La principal ventaja de la prueba es que el resultado no se ve afectado por la presencia de compuestos de terceros en la muestra. El método también tiene un inconveniente: para la prueba se requieren costosos instrumentos de medición de fabricantes alemanes o suecos.
Conclusión
El método colorimétrico es preciso y fácil de usar. Su uso en medicina permite la detección temprana de diversos cambios patológicos en el cuerpo. Con la introducción de nuevas tecnologías, el método se está mejorando y se está volviendo cada vez más popular.
