Recientemente, se ha desarrollado un método confiable, altamente sensible y rápido para diagnosticar varias enfermedades infecciosas humanas. Este método se llama "análisis PCR". Qué es, cuál es su esencia, qué microorganismos puede revelar y cómo tomarlo correctamente, lo diremos en nuestro artículo.
Historial de descubrimientos
Inventó el método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) por el científico estadounidense Kary Mullis en 1983. Inicialmente, el método de diagnóstico fue patentado por Cetus Corporation, en la que trabajaba su creador. Pero en 1992, todos los derechos y patentes se vendieron a Hoffman-La Roche. Después de eso, resultó que estudios similares se llevaron a cabo en paralelo y fueron registrados por otros biólogos estadounidenses, como Alice Chen, David Edgar, John Trell. En 1980, los científicos soviéticos A. Slyusarenko, A. Kaledin y S. Gorodetsky también se ocuparon de este problema. Por lo tanto, fue imposible determinar el único titular de los derechos de autor. Muchos bioquímicos prominentes han hecho una cierta contribución al desarrollo de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa y han patentado sus innovaciones. En la actualidad, el análisisLa PCR se lleva a cabo en todas partes en laboratorios especialmente equipados.
La esencia del método de diagnóstico por PCR
Análisis PCR: ¿qué es y cómo funciona? La esencia del método es aumentar el volumen de un determinado entorno microbiano en condiciones artificiales utilizando una enzima especial de ADN polimerasa. Para ello, el material de ADN existente se multiplica muchas veces. Así, ante la presencia de un microorganismo patógeno en la muestra, su cantidad aumentará debido a las manipulaciones bioquímicas del laboratorio, y no será difícil detectar la bacteria al microscopio.
¿Cómo se realiza la investigación de materiales?
Requerido para el análisis:
- matriz de ADN;
- imprimadores que conectan los extremos de una pieza de material;
- enzima ADN polimerasa resistente al calor;
- sustancias químicas que hacen que las enzimas funcionen correctamente;
- solución tampón necesaria para crear las condiciones apropiadas para el crecimiento y desarrollo del material de ADN.
Para realizar la PCR se realizan de 25 a 30 repeticiones, que consta de tres etapas: desnaturalización, hibridación y elongación.
Para el análisis de la reacción en cadena del polímero, se utiliza un dispositivo especial: un amplificador. El equipo moderno le permite configurar el programa necesario para calentar y enfriar los tubos para eliminar errores durante el diagnóstico.
¿Dónde se utiliza el diagnóstico?
El método de reacción en cadena de polímeros se utiliza en varios campos de la medicina:
- criminalistas conidentifica material genético como cabello, saliva o sangre;
- La prueba de sangre PCR ayuda con la genotipificación, por ejemplo, para detectar una reacción individual genéticamente inherente a un determinado fármaco;
- usando este método para establecer la presencia de lazos familiares entre personas;
- El método de PCR más popular se ha convertido en diagnóstico médico para determinar diversas enfermedades infecciosas.
¿Qué infecciones detecta la PCR?
Entonces, la medicina ha utilizado durante mucho tiempo y con éxito el análisis PCR. Qué es, ya lo sabemos. ¿Y qué patógenos se pueden detectar con él? Las siguientes enfermedades infecciosas se diagnostican mediante el método PCR:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- clamidia;
- micoplasmosis;
- gardnerelosis;
- mononucleosis infecciosa;
- tricomoniasis;
- infección por virus del papiloma humano;
- tuberculosis;
- infección por herpes tipos 1 y 2;
- helicobacteriosis;
- citomegalovirus;
- difteria;
- salmonelosis;
- Infección por VIH.
Además, los métodos de PCR se utilizan en el diagnóstico del cáncer.
Beneficios del método
El diagnóstico por PCR tiene varias ventajas:
- Alta sensibilidad. Incluso en presencia de solo unas pocas moléculas de ADN de microorganismos, el análisis de PCR determina la presencia de infección. El método ayudará con enfermedades crónicas y latentes. A menudo, en tales casos, el microorganismode lo contrario no se puede cultivar.
- Cualquier material es adecuado para la investigación, como la saliva, la sangre, las secreciones genitales, el cabello, las células epiteliales. El más común es el análisis de sangre y frotis urogenital para PCR.
- No se requiere cultivo a largo plazo. El proceso de diagnóstico automatizado le permite obtener los resultados del estudio después de 4 a 5 horas.
- El método es casi 100% confiable. Solo se han registrado casos aislados de falsos negativos.
- La capacidad de identificar varios tipos de patógenos a partir de una sola muestra de material. Esto no solo acelera el proceso de diagnóstico de la enfermedad, sino que también reduce significativamente los costos de material. A menudo, el médico prescribe un análisis completo de PCR. El precio del examen, que consiste en la determinación de seis patógenos, es de unos 1.500 rublos.
Recomendaciones para prepararse para el análisis
Para que los resultados sean confiables durante el estudio PCR, es necesario realizar la prueba, siguiendo las recomendaciones de preparación preliminar para el diagnóstico:
- Antes de donar saliva, debe abstenerse de comer y tomar medicamentos 4 horas antes de la muestra. Inmediatamente antes del procedimiento, enjuáguese la boca con agua hervida.
- También se deben seguir las reglas anteriores al tomar una muestra de la superficie interna de la mejilla. Después del enjuague, se recomienda realizar un ligero masaje en la piel para res altar la secreción de la glándula.
- La orina generalmente se recolecta en casa. Para hacer esto, debe realizar un baño completo.genitales. Recoja 50-60 ml de orina en un recipiente de plástico estéril. Para garantizar la pureza del material, se recomienda que las mujeres inserten un tampón en la vagina y que los hombres retraigan el pliegue de la piel tanto como sea posible. No dones durante tu período.
- Para donar esperma, debe abstenerse de tener relaciones sexuales durante 3 días antes de la muestra. Los médicos también desaconsejan visitar la sauna y tomar un baño caliente, beber alcohol y comidas picantes. Debe abstenerse de orinar 3 horas antes de la prueba.
- Para tomar un frotis urogenital, por ejemplo, si se realiza una prueba de PCR para clamidia, se recomienda tanto a mujeres como a hombres que tengan reposo sexual durante 3 días. Los medicamentos antibacterianos no deben tomarse 2 semanas antes del análisis. Durante una semana, debe dejar de usar geles íntimos, ungüentos, óvulos vaginales, duchas vaginales. 3 horas antes del examen, debe abstenerse de orinar. Durante la menstruación, no se realiza el muestreo, solo 3 días después del cese de la descarga de sangre, puede tomar un frotis urogenital.
PCR durante el embarazo
Durante el período de espera del bebé, muchas infecciones de transmisión sexual son extremadamente peligrosas para el desarrollo normal del feto. Las ETS pueden provocar retraso del crecimiento intrauterino, aborto espontáneo o parto prematuro, malformaciones congénitas del niño. Por lo tanto, es extremadamente importante someterse a un examen de PCR al principio del embarazo. Es necesario pasar el análisis al registrarse - hasta 12 semanas.
El material se extrae del canal cervical con un cepillo especial. El procedimiento es indoloro y no representa un peligro para el bebé. Por lo general, durante el embarazo, se realiza un análisis de clamidia por el método de PCR, así como de ureaplasmosis, micoplasmosis, citomegalovirus, herpes, papilomavirus. Tal complejo de exámenes se llama PCR-6.
PCR para diagnóstico de VIH
Debido a que el método de reacción en cadena de la polimerasa es muy sensible a los cambios en el cuerpo y las condiciones del diagnóstico, muchos factores pueden afectar el resultado. Por lo tanto, el análisis de PCR para la infección por VIH no es un método confiable, su eficiencia es del 96 al 98%. En el 2-4% restante de los casos, la prueba da resultados falsos positivos.
Pero en algunas situaciones, el diagnóstico por PCR del VIH es indispensable. Por lo general, se administra a personas con un resultado ELISA falso negativo. Dichos indicadores indican que una persona aún no ha desarrollado anticuerpos contra el virus y no se pueden detectar sin un aumento múltiple en el número. Esto es exactamente lo que se puede lograr realizando un análisis de sangre PCR.
Estos diagnósticos también son necesarios para los niños de primer año de vida nacidos de una madre seropositiva. El método es la única forma de determinar de forma fiable el estado de un niño.
PCR para el diagnóstico de hepatitis
El método de reacción en cadena de la polimerasa permite detectar el ADN del virus de la hepatitis A, B, C mucho antes de la formación de anticuerpos contra la infección o la aparición de los síntomas de la enfermedad. El análisis PCR para hepatitis C es especialmente efectivo, ya que en el 85% de los casos esta enfermedad es asintomática y sinel tratamiento oportuno entra en la etapa crónica.
La detección oportuna del patógeno ayudará a evitar complicaciones y tratamientos a largo plazo.
Examen completo de PCR
Análisis PCR complejo: ¿qué es? Se trata de un examen por el método de reacción en cadena polimérica, que incluye la determinación de varios tipos de infecciones simultáneamente: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, tricomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes tipos 1 y 2, gonorrea, papilomavirus. El precio de tales diagnósticos oscila entre 2000 y 3500 rublos. dependiendo de la clínica, los materiales y equipos utilizados, así como del tipo de análisis: cualitativo o cuantitativo. Lo que es necesario en su caso: el médico decidirá. En algunos casos, basta con determinar la presencia del patógeno, en otros, por ejemplo, con la infección por VIH, un título cuantitativo juega un papel importante. Cuando se diagnostican todos los patógenos anteriores, el examen se denomina "análisis PCR-12".
Transcripción de los resultados del análisis
Descifrar el análisis PCR no es difícil. Solo hay 2 escalas del indicador: "resultado positivo" y "resultado negativo". Cuando se detecta un patógeno, los médicos pueden confirmar la presencia de la enfermedad con un 99 % de certeza y comenzar a tratar al paciente. Con un método cuantitativo para determinar la infección, la columna correspondiente indicará el indicador numérico de bacterias detectadas. Solo un médico puede determinar el alcance de la enfermedad y prescribir el tratamiento necesario.
En algunos casos, por ejemplo, al determinar la infección por VIH por PCR, con un resultado negativo, se hace necesario realizar exámenes adicionales para confirmar los indicadores obtenidos.
¿Dónde hacerse la prueba?
¿Dónde hacerse la prueba PCR: en una clínica pública o en un laboratorio privado? Desafortunadamente, en las instituciones médicas municipales, el equipo y los métodos suelen estar desactualizados. Por lo tanto, es mejor dar preferencia a laboratorios privados con equipos modernos y personal altamente calificado. Además, en una clínica privada obtendrás resultados mucho más rápido.
En Moscú, muchos laboratorios privados ofrecen análisis PCR para diversas infecciones. Por ejemplo, en clínicas como Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, se lleva a cabo el análisis de PCR. El precio del examen es de 200 rublos. para identificar un patógeno.
Se puede concluir que el diagnóstico de enfermedades infecciosas por PCR en la mayoría de los casos es una forma rápida y confiable de detectar el patógeno en el cuerpo en las primeras etapas de la infección. Pero aún así, en ciertos casos, vale la pena elegir otros métodos de diagnóstico. Solo un especialista puede determinar la necesidad de dicho estudio. Descifrar el análisis PCR también requiere un enfoque profesional. Siga los consejos de su médico y no se haga pruebas que no necesite.
