El diagnóstico de laboratorio de casi todas las enfermedades infecciosas se basa en la detección de anticuerpos en la sangre del paciente, que se producen contra los antígenos del patógeno, mediante métodos de reacciones serológicas. Entraron en la práctica médica desde finales del siglo XIX hasta principios del siglo XX.
El desarrollo de la ciencia ha ayudado a determinar la estructura antigénica de los microbios y las fórmulas químicas de sus toxinas. Esto hizo posible crear no solo sueros terapéuticos, sino también de diagnóstico. Se obtienen administrando patógenos atenuados a animales de laboratorio. Después de varios días de exposición, la sangre de conejos o ratones se usa para preparar preparaciones que sirven para identificar microbios o sus toxinas mediante pruebas serológicas.
La manifestación externa de tal reacción depende de las condiciones de su entorno y del estado de los antígenos en la sangre del paciente. Si las partículas microbianas son insolubles, precipitan, lisan, se unen o inmovilizan en el suero. Si los antígenos son solubles, entonces aparece el fenómeno de neutralización o precipitación.
Reacción de aglutinación (RA)
La prueba de aglutinación serológica es altamente específica. Es fácil de realizar y bastantevisual, para determinar rápidamente la presencia de antígenos en el suero sanguíneo del paciente. Se utiliza para probar la reacción de Vidal (diagnóstico de fiebre tifoidea y paratifoidea) y Weigl (fiebre tifoidea).
Se basa en una interacción específica entre los anticuerpos humanos (o aglutininas) y las células microbianas (aglutinógenos). Después de su interacción, se forman partículas que precipitan. Esta es una señal positiva. Se pueden utilizar agentes microbianos vivos o muertos, hongos, protozoos, células sanguíneas y células somáticas para iniciar la reacción.
Químicamente, la reacción se divide en dos pasos:
- Conexión específica de anticuerpos (AT) con antígenos (AG).
- No específico: precipitación de conglomerados AG-AT, es decir, formación de aglutinados.
Reacción de aglutinación indirecta (IPHA)
Esta reacción es más sensible que la anterior. Se utiliza para diagnosticar enfermedades causadas por bacterias, parásitos intracelulares y protozoos. Es tan específico que incluso pueden detectarse concentraciones muy bajas de anticuerpos.
Para su producción se utilizan eritrocitos de oveja purificados y glóbulos rojos humanos pretratados con anticuerpos o antígenos (dependiendo de lo que quiera encontrar el técnico de laboratorio). En algunos casos, los glóbulos rojos humanos se tratan con inmunoglobulinas. Se considera que han tenido lugar reacciones serológicas de eritrocitos si se han depositado en el fondo del tubo. Sobre una reacción positivadecir cuando las celdas se disponen en forma de paraguas invertido, ocupando todo el fondo. Se cuenta como reacción negativa si los eritrocitos se depositaron en una columna o en forma de botón en el centro del fondo.
Reacción de precipitación (RP)
Las reacciones serológicas de este tipo se utilizan para detectar partículas extremadamente pequeñas de antígenos. Estos pueden ser, por ejemplo, proteínas (o partes de las mismas), compuestos de proteínas con lípidos o carbohidratos, partes de bacterias, sus toxinas.
Los sueros para la reacción se obtienen infectando artificialmente animales, generalmente conejos. Por este método, puede obtener absolutamente cualquier suero precipitante. El escenario de las reacciones serológicas de precipitación es similar en mecanismo de acción a las reacciones de aglutinación. Los anticuerpos contenidos en el suero se combinan con los antígenos en una solución coloidal, formando grandes moléculas de proteína que se depositan en el fondo del tubo o en el sustrato (gel). Este método se considera altamente específico y puede detectar incluso cantidades insignificantes de una sustancia.
Se utiliza para diagnosticar peste, tularemia, ántrax, meningitis y otras enfermedades. Además, está involucrado en un examen médico forense.
Reacción de precipitación en gel
Las reacciones serológicas pueden llevarse a cabo no solo en medio líquido, sino también en gel de agar. Esto se llama el método de precipitación difusa. Con su ayuda, se estudia la composición de mezclas antigénicas complejas. Este método se basa en la quimiotaxis de antígenos a anticuerpos y viceversa. En un gel se muevenuno hacia el otro a diferentes velocidades y, al encontrarse, forman líneas de precipitación. Cada línea es un juego de AG-AT.
Reacción de neutralización de exotoxinas con antitoxina (PH)
Los sueros antitóxicos son capaces de neutralizar la acción de las exotoxinas producidas por microorganismos. Estas reacciones serológicas se basan en esto. La microbiología utiliza este método para valorar sueros, toxinas y toxoides y determinar su actividad terapéutica. El poder de neutralización de toxinas está determinado por unidades convencionales - AE.
Además, gracias a esta reacción es posible determinar la especie o tipo de exotoxina. Esto se utiliza en el diagnóstico de tétanos, difteria, botulismo. El estudio se puede realizar tanto “sobre vidrio” como en gel.
Reacción de lisis (RL)
El suero inmune, que ingresa al cuerpo del paciente, tiene, además de su función principal de inmunidad pasiva, también propiedades de lisis. Es capaz de disolver agentes microbianos, elementos extraños celulares y virus que ingresan al cuerpo del paciente. Dependiendo de la especificidad de los anticuerpos incluidos en el suero, se aíslan bacteriolisinas, citolisinas, espiroquetolizinas, hemolisinas y otras.
Estos anticuerpos específicos se denominan "complemento". Se encuentra en casi todos los fluidos corporales humanos, tiene una estructura proteica compleja y es extremadamente sensible al aumento de temperatura, las sacudidas, los ácidos y la luz solar directa. Pero en estado seco es capaz de retenersus propiedades lisantes hasta seis meses.
Existen estos tipos de reacciones serológicas de este tipo:
- bacteriólisis;
- hemólisis.
La bacteriólisis se realiza con suero sanguíneo del paciente y suero inmunitario específico con microbios vivos. Si hay suficiente complemento en la sangre, el investigador verá que la bacteria se lisa y la reacción se considerará positiva.
La segunda reacción serológica de la sangre es que una suspensión de glóbulos rojos del paciente se trata con suero que contiene hemolisinas, que se activan solo en presencia de cierto complemento. Si hay uno, entonces el asistente de laboratorio observa la disolución de los glóbulos rojos. Esta reacción se usa ampliamente en la medicina moderna para determinar el título del complemento (es decir, su cantidad más pequeña que provoca la lisis de los eritrocitos) en el suero sanguíneo y para realizar un análisis de fijación del complemento. Es de esta manera que se realiza una prueba serológica para la sífilis: la reacción de Wasserman.
Reacción de fijación del complemento (CFR)
Esta reacción se utiliza para detectar anticuerpos contra un agente infeccioso en el suero sanguíneo del paciente, así como para identificar el patógeno por su estructura antigénica.
Hasta este punto, hemos descrito reacciones serológicas simples. La RSK se considera una reacción compleja, ya que en ella interactúan no dos, sino tres elementos: anticuerpo, antígeno y complemento. Su esencia radica en el hecho de que la interacción entre el anticuerpo y el antígenoocurre solo en presencia de proteínas del complemento, que se adsorben en la superficie del complejo AG-AT formado.
Los propios antígenos, después de la adición del complemento, sufren cambios significativos que muestran la calidad de la reacción. Puede ser lisis, hemólisis, inmovilización, acción bactericida o bacteriostática.
La reacción en sí se produce en dos fases:
- Formación de un complejo antígeno-anticuerpo que no es visible para el examinador.
- Cambio en el antígeno bajo la acción del complemento. Esta fase se puede rastrear con mayor frecuencia a simple vista. Si la reacción no es visualmente visible, se utiliza un sistema indicador adicional para identificar los cambios.
Sistema de indicadores
Esta reacción se basa en la fijación del complemento. Los eritrocitos de carnero purificados y el suero hemolítico libre de complemento se agregan al tubo de ensayo una hora después de configurar el RSC. Si queda un complemento no unido en el tubo de ensayo, se unirá al complejo AG-AT formado entre las células de sangre de carnero y la hemolisina, y hará que se disuelvan. Esto significará que RSK es negativo. Si los eritrocitos permanecieron intactos, entonces, en consecuencia, la reacción es positiva.
Prueba de hemaglutinación (RGA)
Hay dos reacciones de hemaglutinación fundamentalmente diferentes. Uno de ellos es serológico, se utiliza para determinar grupos sanguíneos. En este caso, los glóbulos rojos interactúan con los anticuerpos.
Y el segundola reacción no se aplica a la serología, ya que los glóbulos rojos reaccionan con las hemaglutininas producidas por los virus. Dado que cada patógeno actúa solo sobre eritrocitos específicos (pollo, cordero, mono), esta reacción puede considerarse altamente específica.
Puede saber si una reacción es positiva o negativa por la ubicación de las células sanguíneas en el fondo del tubo de ensayo. Si su patrón se parece a un paraguas invertido, entonces el virus deseado está presente en la sangre del paciente. Y si todos los eritrocitos se han formado como una columna de monedas, entonces no hay patógenos deseados.
Prueba de inhibición de la hemaglutinación (HITA)
Esta es una reacción altamente específica que permite determinar el tipo, tipo de virus o la presencia de anticuerpos específicos en el suero sanguíneo del paciente.
Su esencia radica en el hecho de que los anticuerpos agregados al tubo de ensayo con el material de prueba evitan la deposición de antígenos en los eritrocitos, deteniendo así la hemaglutinación. Este es un signo cualitativo de la presencia en la sangre de antígenos específicos para el virus específico que se busca.
Reacción de inmunofluorescencia (RIF)
La reacción se basa en la capacidad de detectar complejos AG-AT con microscopía fluorescente después de su tratamiento con tintes de fluorocromo. Este método es fácil de manejar, no requiere aislamiento de cultivo puro y lleva poco tiempo. Es indispensable para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas.
En la práctica, estas reacciones serológicas se dividen en dos tipos: directas e indirectas.
Direct RIF se produce a partir deantígeno, que se trata previamente con suero fluorescente. Y la indirecta es que primero se trata el fármaco con un diagnóstico convencional que contiene antígenos para los anticuerpos de interés, y luego se vuelve a aplicar el suero luminiscente, que es específico para las proteínas del complejo AG-AT, y las células microbianas hacerse visible bajo el microscopio.
