El estudio de las bacterias es de gran importancia práctica para los humanos. Hasta la fecha, se ha descubierto una gran cantidad de procariotas, que difieren entre sí en patogenicidad, área de distribución, forma, tamaño, número de flagelos y otros parámetros. Para estudiar esta cepa en detalle, se utiliza un método de investigación bacteriológica.
¿Cuáles son los métodos para analizar células bacterianas?
Para determinar si las bacterias son patógenas, el cultivo se examina de varias maneras. Entre ellos:
1. Método bacterioscópico.
2. Método bacteriológico.
3. Método biológico.
Los métodos de investigación bacterioscópicos y bacteriológicos se basan directamente en el trabajo con células procariotas, cuando se requiere un análisis biológico para estudiar el efecto de dichas células en el organismo vivo de los animales de experimentación. De acuerdo con el grado de manifestación de ciertos signos de la enfermedad, el científico puede hacerconcluir sobre la presencia o ausencia de bacterias patógenas en la muestra, así como propagarlas naturalmente en el cuerpo del animal para obtener su cultivo y uso en otros trabajos.
El método bacteriológico de investigación difiere del bacterioscópico. En el primero, se utiliza para el análisis un cultivo especialmente preparado de procariotas vivas, mientras que en el segundo, se trabaja con células muertas o vivas en un portaobjetos de vidrio.
Etapas del método de investigación bacteriológica. Microbiología
El principio de estudiar las propiedades de un cultivo bacteriano puede ser útil tanto para los microbiólogos que se han fijado el objetivo de estudiar las células procarióticas, como para los técnicos de laboratorio cuya tarea es establecer la patogenicidad o no patogenicidad de las bacterias, y luego diagnostique al paciente.
El método de estudio de las bacterias se divide en tres etapas:
1. Aislamiento de bacterias de la muestra original.
2. Sembrando bacterias y cultivando un cultivo puro, estudiando sus propiedades.
3. Estudio detallado de las células bacterianas.
Primera etapa
La muestra, o frotis, se toma de la superficie libre del medio o del paciente. Así, obtenemos un "cóctel" de muchos tipos de bacterias que deben sembrarse en un medio nutritivo. A veces es posible aislar inmediatamente las bacterias necesarias, conociendo sus focos de distribución en el cuerpo.
Después de dos o tres días, se seleccionan las colonias deseadas yse siembran en medios sólidos de placas de Petri con la ayuda de un asa estéril. Muchos laboratorios trabajan con tubos de ensayo, que pueden contener medios nutrientes sólidos o líquidos. Así es como se lleva a cabo el método bacteriológico de investigación en microbiología.
Segunda etapa
Después de obtener colonias individuales de bacterias, se realiza un macro y microanálisis directo. Se miden todos los parámetros de las colonias, se determina el color y la forma de cada una de ellas. No es raro contar colonias en una placa de Petri y luego en el material de partida. Esto es importante en el análisis de bacterias patógenas, cuyo número depende del grado de la enfermedad.
El método bacteriológico de investigación, cuya segunda etapa consiste en estudiar colonias individuales de microorganismos, se puede asociar con un método biológico para analizar bacterias. Otro objetivo de trabajar en esta etapa es aumentar la cantidad de material de origen. Esto se puede hacer en un medio nutritivo, o puede realizar un experimento in vivo en organismos experimentales vivos. Las bacterias patógenas se multiplicarán y, como resultado, la sangre contendrá millones de células procariotas. Es fácil preparar el material de trabajo necesario de bacterias a partir de la sangre extraída.
Tercera etapa
La parte más importante del estudio es la determinación de las propiedades morfológicas, bioquímicas, toxigénicas y antigénicas del cultivo bacteriano. El trabajo se lleva a cabo con cultivos previamente limpiados en un medio nutritivo, así como con preparaciones (a menudo teñidas) bajo un microscopio.
Establecer propiedadbacterias patógenas u oportunistas a uno u otro grupo sistemático, así como para determinar su resistencia a las drogas, permite el método bacteriológico de investigación. Etapa 3: antibióticos, es decir, análisis del comportamiento de las células bacterianas en las condiciones del contenido de medicamentos en el medio ambiente.
El estudio de la resistencia a los antibióticos de un cultivo tiene una gran importancia práctica cuando es necesario prescribir los medicamentos necesarios y, sobre todo, eficaces para un paciente en particular. Aquí es donde el método de investigación bacteriológica puede ayudar.
¿Qué es un medio de cultivo?
Para el desarrollo y la reproducción, las bacterias deben estar en medios nutritivos preparados previamente. Por consistencia, pueden ser líquidos o sólidos, y por origen, vegetal o animal.
Requisitos multimedia básicos:
1. Esterilidad.
2. Máxima transparencia.
3. Indicadores óptimos de acidez, presión osmótica, actividad del agua y otros valores biológicos.
Obtención de colonias aisladas
1. Método Drygalsky. Consiste en el hecho de que se aplica un frotis con varios tipos de microorganismos al asa bacteriana. Este bucle se pasa a lo largo de la primera placa de Petri con un medio nutritivo. Además, sin cambiar el bucle, el método de material residual se lleva a cabo en la segunda y tercera placa de Petri. Entonces, en las últimas muestras de la colonia, las bacterias no se sembrarán con demasiada densidad, lo que simplificará la capacidad de encontrar las necesarias para el trabajo.bacterias.
2. método de Koch. Utiliza tubos de ensayo con medio nutriente fundido. Allí se coloca un asa o una pipeta con una mancha de bacterias, después de lo cual se vierte el contenido del tubo de ensayo en un plato especial. El agar (o gelatina) se solidifica después de un tiempo y es fácil encontrar las colonias de células deseadas en su espesor. Es importante diluir la mezcla de bacterias en probetas antes de empezar a trabajar para que la concentración de microorganismos no sea demasiado elevada.
El método bacteriológico de investigación, cuyas etapas se basan en el aislamiento del cultivo bacteriano deseado, no puede prescindir de estos dos métodos para encontrar colonias aisladas.
Antibiograma
Visualmente, la reacción de las bacterias a los medicamentos se puede ver de dos formas prácticas:
1. Método del disco de papel.
2. Crianza de bacterias y antibióticos en un medio líquido.
El método del disco de papel requiere un cultivo de microorganismos que hayan crecido en un medio nutritivo sólido. En tal medio, coloque algunos pedazos de papel redondeado empapado en antibióticos. Si el medicamento hace frente con éxito a la neutralización de las células bacterianas, después de dicho tratamiento habrá un área sin colonias. Si la reacción al antibiótico es negativa, la bacteria sobrevivirá.
En el caso de utilizar un medio nutritivo líquido, preparar primero varios tubos de ensayo con un cultivo de bacterias de diferentes diluciones. Se agregan antibióticos a estos tubos de ensayo y se observa el proceso de interacción entre la sustancia y los microorganismos durante el día. Como resultado, se obtiene un antibiograma de alta calidad, según el cual es posiblejuzgar la eficacia del fármaco para un cultivo determinado.
Principales tareas de análisis
Aquí se enumeran los objetivos y las etapas del método bacteriológico de investigación.
1. Obtener el material de partida que se utilizará para aislar colonias bacterianas. Puede ser un frotis de la superficie de cualquier objeto, membrana mucosa o cavidad de un órgano humano, un análisis de sangre.
2. Cultivo de cultivo en un medio nutriente sólido. Después de 24 a 48 horas, se pueden encontrar colonias de diferentes tipos de bacterias en la placa de Petri. Seleccionamos el deseado según criterios morfológicos y/o bioquímicos y realizamos un trabajo posterior con él.
3. Propagación de la cultura resultante. El método de investigación bacteriológica puede basarse en un método mecánico o biológico para aumentar el número de cultivos bacterianos. En el primer caso, el trabajo se lleva a cabo con medios nutrientes sólidos o líquidos, en los que las bacterias se multiplican en un termostato y forman nuevas colonias. El método biológico requiere condiciones naturales para aumentar el número de bacterias, por lo que aquí el animal de experimentación se infecta con microorganismos. Después de unos días, se pueden encontrar muchas procariotas en una muestra o frotis de sangre.
4. Trabajo con cultivo purificado. Para determinar la posición sistemática de las bacterias, así como su pertenencia a los patógenos, es necesario realizar un análisis exhaustivo de las células según las características morfológicas y bioquímicas. Al estudiar grupos patógenos de microorganismos, es importante saberqué tan efectivos son los antibióticos.
Esta era una característica general del método de investigación bacteriológica.
Características del análisis
La regla principal de la investigación bacteriológica es la máxima esterilidad. Si está trabajando con tubos de ensayo, los cultivos y subcultivos de bacterias deben realizarse únicamente sobre una lámpara de alcohol calentada.
Todas las etapas del método de investigación bacteriológica requieren el uso de un asa especial o una pipeta Pasteur. Ambas herramientas deben ser pretratadas en la llama de una lámpara de alcohol. En cuanto a la pipeta Pasteur, aquí, antes de la esterilización térmica, es necesario romper la punta de la pipeta con unas pinzas.
La técnica de siembra de bacterias también tiene sus propias características. Primero, cuando se inocula en medios sólidos, se pasa un asa bacteriana sobre la superficie del agar. El bucle, por supuesto, ya debería tener una muestra de microorganismos en la superficie. También se practica la inoculación en el medio de cultivo, en cuyo caso el asa o pipeta debe llegar al fondo de la placa de Petri.
Cuando se trabaja con medios líquidos, se utilizan tubos de ensayo. Aquí es importante asegurarse de que los líquidos no toquen los bordes de la cristalería de laboratorio o los tapones, y que los instrumentos utilizados (pipeta, asa) no toquen superficies ni objetos extraños.
La importancia del método de investigación biológica
El análisis de muestras de bacterias tiene sus aplicaciones prácticas. Ante todoEl método de investigación bacteriológica se puede utilizar en medicina. Por ejemplo, es necesario estudiar la microflora del paciente para establecer el diagnóstico correcto, así como para desarrollar el curso de tratamiento correcto. Un antibiograma ayuda aquí, que mostrará la actividad de las drogas contra el patógeno.
El análisis de bacterias se utiliza en el laboratorio para detectar enfermedades peligrosas como la tuberculosis, la fiebre recurrente o la gonorrea. También se utiliza para estudiar la composición bacteriana de las amígdalas, cavidades de órganos.
El método de investigación bacteriológica se puede utilizar para determinar la contaminación del medio ambiente. De acuerdo con los datos sobre la composición cuantitativa y cualitativa de una mancha de la superficie de un objeto, se determina el grado de población de este entorno por microorganismos.
